Что такое ретикулоциты у собаки

Опубликовано: 07.05.2024

Срок исполнения

1 день (плюс 1-2 дня для регионов)

Исследуемый материал

Метод определения

микроскопия мазка (суправитальный метод окраски ретикулоцитов)

Определение количества ретикулоцитов используется при наличии анемии. Скорость высвобождения ретикулоцитов из костного мозга является лучшим показателем функции эритроидного компонента костного мозга.

Ретикулоциты – незрелые безъядерные эритроциты млекопитающих, которые содержат остаточные РНК и митохондрии, агрегированные в форме гранулярной сетчатой структуры (ретикулума) и выявляемые при использовании метода суправитального окрашивания метиленовым синим (окраска живых клеток). При созревании эритроцитов эта ретикулярная сеть исчезает. Высвобождение ретикулоцитов из костного мозга происходит в ответ на анемию. В зависимости от содержания остаточного количества рибосом и, соответственно, зрелости клеток выделяют два вида ретикулоцитов: агрегатные и зернистые (пунктатные). Агрегатные ретикулоциты циркулируют в крови в течение короткого промежутка времени (около 12 часов), прежде чем превратятся в зернистые (пунктатные) ретикулоциты, которые затем (через 10 дней) преобразовываются в зрелые эритроциты. Количество зернистых (пунктатных) и агрегатных ретикулоцитов возрастает с увеличением интенсивности эритропоэза. Поскольку зернистые ретикулоциты циркулируют в течение нескольких недель и сохраняются после того, как уровень агрегатных ретикулоцитов вернется в пределы референсных значений, их подсчет не имеет большого клинического значения при оценке текущего регенераторного ответа. Присутствие зернистых ретикулоцитов указывает на реакцию костного мозга на анемию, имевшую место примерно три недели назад.

При исследовании ретикулоцитов определяется процент ретикулоцитов путем пересчета на 1000 зрелых эритроцитов. При использовании этого показателя возможна некорректная оценка ответа костного мозга, потому как:

Ретикулоциты, высвобождаемые из костного мозга в кровь у животных при анемии, смешиваются с меньшим количеством зрелых эритроцитов. Таким образом, в результате происходит завышение процента ретикулоцитов.
Менее зрелые формы ретикулоцитов выходят в кровяное русло в ответ на анемию раньше (сдвиг ретикулоцитов). Эти ретикулоциты дольше сохраняются в крови потому, что им требуется больше времени для созревания, что приводит к завышению процента ретикулоцитов.

Скорректированный процент ретикулоцитов. При его расчете учитывается величина гематокрита. Вносимая корректировка актуальна только в случае, указанном в пункте 1, но не в случае, указанном в пункте 2. Скорректированный процент ретикулоцитов больше чем 1% у собак и 0,4% у кошек указывает на стимуляцию костного мозга в ответ на анемическое состояние. Скорректированный процент ретикулоцитов не был подтвержден для использования у других видов животных.

Абсолютное число ретикулоцитов. Этот параметр вносит коррективы в случае, описанном в пункте 1 (выше), но не корректирует эффект, описанный в пункте 2. Получение абсолютного числа ретикулоцитов больше чем 80х109/л у собак и более 60х109/л у кошек указывает на регенеративный ответ (регенераторную анемию), и что причиной анемии являются внешние воздействия на костный мозг (т. е. кровотечение или гемолиз). В зависимости от снижения гематокрита или при очень низком гематокрите должно иметь место пропорционально более высокое абсолютное число ретикулоцитов.

Ретикулоцитарный индекс. Этот поправочный коэффициент используется для человека, но также был применен у собак и кошек для корректировки пунктов 1 и 2 (см. выше). Значимость этого параметра остается спорной, поскольку отсутствуют данные, подтверждающие успешное его использование у животных.

В крови здоровых собак может содержаться небольшое количество ретикулоцитов (до 1%). У собак все ретикулоциты агрегатные, т. е. они больше, чем зрелые эритроциты, и содержат большие глыбки агрегированных рибосом. Ретикулоцитоз у кошек менее выражен, чем у собак. У кошек выделяют две формы ретикулоцитов: зернистые (пунктатные) и агрегатные. Зернистые ретикулоциты более зрелые, чем агрегатные, и близки по размерам к созревшим эритроцитам. Они содержат от двух до шести мелких включений гранулярно-нитчатой субстанции остаточной РНК. У здоровых кошек может насчитываться до 10% зернистых (пунктатных) ретикулоцитов. После эпизода разрушения эритроцитов, возрастание числа зернистых (пунктатных) ретикулоцитов происходит через одну неделю, пик роста приходится на 2-3 неделю, затем их число постепенно снижается. Таким образом, увеличение зернистых (пунктатных) ретикулоцитов указывает на стимуляцию регенераторного ответа, произошедшую за 2-4 недели до этого, в то время как увеличение агрегатных ретикулоцитов указывает на недавнюю стимуляцию костного мозга. Увеличение числа агрегатных ретикулоцитов свидетельствует о текущей активности костного мозга в ответ на анемию (т. е. увеличение интенсивности эритропоэза или регенерации). Определение количества агрегатных ретикулоцитов является наиболее полезным при оценке реакции костного мозга при анемии, при этом зернистые (пунктатные) ретикулоциты обычно не подсчитываются (они считаются зрелыми клетками). Тем не менее, при легкой степени анемии подсчет пунктатных ретикулоцитов является полезным, поскольку обычно происходит сохранение агрегированных ретикулоцитов в костном мозге до их созревания в зернистые (пунктатные).

Отсутствие ретикулоцитов после развития анемии позволяет предположить отсутствие адекватной реакции костного мозга (нерегенеративную анемию). Это может наблюдаться при нехватке времени для развития ретикулоцитоза, недостаточности ретикулоцитарного ответа или нарушении эритропоэза.

Сроки исполнения: 1 день (плюс 1-2 дня для регионов).

Исследуемый аналит: цельная кровь.

Метод исследования: микроскопия мазка (суправитальный метод окраски ретикулоцитов ).

Подготовка пациента: перед проведением исследования животное должно быть выдержано на голодной диете минимум 12 часов.

установить, что является причиной появления изменений: снижение образования эритроцитов или повышенное разрушение или потеря эритроцитов.
Оценить ответ эритроидного ростка костного мозга (т.е. подтвердить наличие или отсутствие регенераторного ответа на анемию).

Метод отбора биоматериала: венепункция.

Преаналитика: взятие крови — пробирка с розовой крышкой (с ЭДТА) 0,5 мл; для крупных собак можно использовать пробирку с сиреневой крышкой (с ЭДТА) 2 мл. Заполнить пробирку кровью СТРОГО до отметки на этикетке. Осторожно перевернуть пробирку 7-10 раз для перемешивания крови с антикоагулянтом. Стабильность пробы: 3 дня при +2°С…+8°С. Заполнить направительный бланк, указав код клиента.

Температурный режим транспортировки в лабораторию +2°С …+8°С (синий пакет).

Интерпретация результата: результаты исследования содержат информацию исключительно для врачей. Диагноз ставится на основании комплексной оценки различных показателей, дополнительных сведений и зависит от методов диагностики.

В крови здорового животного ретикулоциты отсутствуют или присутствуют в незначительном количестве менее 1,5%. До 48 часов после острого кровотечения или гемолиза увеличение числа ретикулоцитов бывает не столь заметным, максимальное увеличение наблюдается на 4-7-ой день. Развитие ретикулоцитоза может быть отсрочено у животных с различными системными заболеваниями и у пожилых животных. При регенеративной анемии в условиях адекватного функционирования костного мозга величина ретикулоцитарного ответа должна соответствовать степени тяжести анемии (чем тяжелее анемия и ниже гематокрит, тем сильнее ретикулоцитарный ответ). Гемолитические анемии обычно приводят к более заметному ретикулоцитозу, чем постгеморрагические анемии. Железо из разрушенных эритроцитов более легкодоступно для эритропоэза, чем железо, которое хранится в виде гемосидерина.

Количество ретикулоцитов должно интерпретироваться с учетом степени анемии. Предпочтительнее пользоваться показателем абсолютного числа ретикулоцитов (АЧР), чем процентом ретикулоцитов, так как на показатель АЧР не влияют изменения общего количества эритроцитов. У животных при легкой и тяжелой степени анемии в крови циркулирует одинаковое абсолютное число ретикулоцитов, но процент ретикулоцитов выше при тяжелой анемии, поскольку в крови меньше зрелых клеток. Это может дать ложное впечатление о том, что тяжелая анемия имеет более регенеративный характер, чем умеренная анемия. В качестве альтернативы можно использовать показатель скорректированного процента ретикулоцитов. Иногда для собак используют расчетный ретикулоцитарный индекс. С увеличением тяжести анемии ретикулоциты проводят меньше времени в костном мозге, выходят менее созревшими и дольше находятся в крови до созревания в эритроциты. Это означает, что скорректированный процент ретикулоцитов и абсолютное количество ретикулоцитов могут переоценивать степень активности эритропоэза в костном мозге. Однако ретикулоцитарный индекс не является достоверным у собак и кошек, поскольку в формуле для его расчета используются данные о времени созревания эритроцитов человека, а для животных такие временные характеристики пока неизвестны. Поэтому для животных этот показатель редко рассчитывается с предпочтением подсчета абсолютного количества ретикулоцитов.

Единицы измерения: Абсолютное число ретикулоцитов – клеток /мкл.

500000-значительно выраженная.

Повышение показателя при анемии (регенеративная анемия):

Острая потеря крови.
Гемолиз.
Токсическое действие цинка или меди.
Фрагментация эритроцитов (ДВС-синдром, неоплазия, инвазии кровепаразитов).
Действие змеиного яда.

Понижение показателя при анемии (нерегенеративная анемия):

Острая кровопотеря или гемолиз (длительностью менее 1-2 дней), когда костный мозг еще не успел отреагировать.
Анемия хронических заболеваний.
Недостаточный синтез эритропоэтина (хроническая болезнь почек).
Эндокринопатии (в том числе гипотиреоз).
Дефицит железа (как правило, вторичный по отношению к хроническому наружному кровотечению и обычно выявляемым микроцитозом).
Заболевания костного мозга (снижение способности синтеза).
Инфекционные заболевания (парвовироз, эрлихиоз и др.).
Миелофтиз.
Токсическое повреждение костного мозга.
Истинная эритроцитарная аплазия.
Миелопролиферативные или миелодиспластические заболевания.
Дефицит питательных веществ (редко).

Радюк Екатерина Васильевна - врач-лаборант диагностического отдела ИВЦ МВА

По мере того, как предшественники эритроцитов созревают в костном мозге, они отторгают свои ядра и избавляются от органелл (рибосом и митохондрий), участвующих в клеточном метаболизме и синтезе гемоглобина. Ретикулоциты – это незрелые эритроциты, еще содержащие в цитоплазме рибосомы, но уже лишенные ядер. По сравнению со зрелым эритроцитом они содержат на 20-30% меньше гемоглобина. В мазке, окрашенным стандартным красителем, они выглядят как более крупные и темные эритроциты, поэтому называются также полихроматофильными эритроцитами, или полихроматофилами (рис.1)

Рис.1. Картина регенераторной анемии. Стрелками отмечены ядросодержащие эритроциты; крупные голубые безъядерные клетки – ретикулоциты (полихроматофильные эритроциты).

После выхода из костного мозга ретикулоциты дозревают в периферической крови. Самые молодые ретикулоциты, появляющиеся в периферической крови, называются агрегированными (или агрегатными) ретикулоцитами. Они содержат крупные глыбки преципитированных рибосом (рис. 2).

Рис.2. 3 Агрегатных ретикулоцита (окраска на ретикулоциты)

По мере созревания агрегатные ретикулоциты постепенно превращаются в зернистые (или пунктатные). Зернистые ретикулоциты содержат мелкие точечные агрегаты рибосом (рис. 3).

Рис.3. Стрелкой отмечен зернистый ретикулоцит (окраска на ретикулоциты). Крупные синие точки в других эритроцитах – тельца Хайнца (но это уже совсем другая история).

У собак и кошек есть свои видовые особенности. Ретикулоциты собак созревают быстро (в течение 24 часов). Зернистые ретикулоциты собак являются коротко живущими и обычно не встречаются в значимых количествах. Поэтому при оценке регенераторного ответа у собак учитываются только агрегированные ретикулоциты.

У кошек агрегированные ретикулоциты примерно за 12 часов созревают до зернистых. Зернистые же ретикулоциты могут циркулировать 10-12 суток до своего превращения в эритроциты. Поэтому зернистые ретикулоциты у кошек встречаются в норме в значительных количествах (до 10% от всех эритроцитов); в мазках, окрашенных стандартным красителем, они неотличимы от обычных эритроцитов.

Повышенное количество агрегированных ретикулоцитов и у собак, и у кошек подтверждает недавний регенераторный ответ на анемию. При этом следует помнить, что для того, чтобы костный мозг ответил на анемию, необходимо 3-4 дня, а своего максимума регенераторный ответ достигает через 7 дней. Повышенное количество зернистых ретикулоцитов у кошек указывает на ответ костного мозга, произошедший 3-4 недели назад.

Для подсчёта ретикулоцитов используют как автоматический, так и ручной методы. Однако следует помнить, что гематологические анализаторы, способные подсчитывать ретикулоциты (ProCyte, LaserCyte), учитывают только число агрегированных ретикулоцитов. Подсчет зернистых ретикулоцитов возможен на данный момент только с помощью микроскопии.

Оценка регенераторного ответа

Для оценки регенераторного ответа основываются на проценте ретикулоцитов от общего числа эритроцитов, а также на абсолютном количестве ретикулоцитов в литре или микролитре. Интерпретация самого по себе процента ретикулоцитов (без оценки абсолютного количества) не рекомендуется, так как он не учитывает степени анемии у пациента и будет повышаться при снижении количества зрелых эритроцитов. Нормы обычно устанавливает лаборатория, проводящая данное исследование. Любое повышение числа ретикулоцитов сверх референсного интервала позволяет сделать вывод о регенеративном ответе на анемию. Отсутствие повышения говорит либо об отсутствии регенераторного ответа костного мозга (т.е. о нерегенеративном типе анемии), либо о кровопотере, случившейся 1-2 дня назад (в таком случае костный мозг еще не успел ответить и следует повторить исследование через 5-7 дней).

При подготовке статьи использованы материалы книги «Полное руководство по лабораторным и инструментальным исследованиям у собак и кошек» (Ш.Ваден и др.), а также материалы «Практического курса гематологии собак и кошек для ветеринарных врачей».

г. Балаково, ул. Трнавская, д 4. тел. +7-987-356-69-05

Вы здесь

Введение

Основная функция эритроцитов - транспорт кислорода (O₂) клетками организма и углекислоты (CO₂) из организма, участии в буферных системах ионов водорода, поддержание сосудистой целостности и участие в процессах коагуляции.

Анемия - снижение в системном кровотоке уровня циркулирующих эритроцитов. Анемия кошек и собак - это не первичный диагноз, а вторичный процесс, который может развиваться по трем причинам: 1. При снижении выработки и высвобождения эритроцитов в костном мозге; 2. При повышенной утилизации эритроцитов в организме животного (пр. гемолиз); 3. При кровопотере (наружной или внутренней). Т.е., разграничение точного вида анемии идет с учетом уровня производства эритроцитов (гемопоэз) в соотношение со скоростью их разрушения (гемолиз) или потери (внешняя среда а также третье пространство). В ряде случаев, анемия может развиваться при комбинации различных факторов – снижения производства эритроцитов, укорочения их срока жизни и кровопотери.

Анемия как таковая, достаточно часто диагностируется на приеме в ветеринарной клинике (от 10% до 30% пациентов), она может сопровождаться различными клиническими проявлениями (пр. бледность слизистых оболочек, общая угнетенность, непереносимость, нагрузок, сердечные шумы, слабость наполнения пульсовой волны, гемоглобинурия, пика (pica) или протекать без внешних признаков и диагностироваться исключительно лабораторно. По сути, определение анемии как таковой и ее точные характеристики определяются в клинико-диагностической лаборатории, и диагноз анемии - исключительно лабораторный.

Анемии у животных подразделяются на два основных класса – регенеративная и нерегенеративная. Регенеративная анемия – снижение количества эритроцитов с наличием функциональной способности костного мозга к производству и высвобождению эритроцитов. Нерегенеративная анемия – снижение количества эритроцитов по причине или в сочетании со снижением способности костного мозга к производству и/или высвобождению эритроцитов. Ниже представлены основные причины анемий кошек и собак встречающихся на приеме в ветеринарной клинике.

Таблица. Характерные причины анемий кошек и собак.

Регенеративная анемия

Нерегенеративная анемия

Анемия кровопотери
Наружное и внутреннее кровотечение;
– травма (пр. высотная травма, ДТП, покус);
– кровоточащие опухоли (пр. гемангиосаркома селезенки);
– хирургическое кровотечение;
– кровотечение в ЖКТ;
– тяжелый эктопаразитизм (реже эндопаразитизм);
– нарушения гемостаза (пр. отравление антикоагулянтами, болезнь Вон Виллебранда, тромбоцитопения, ДВС).
Гемолитическая анемия
Иммунноопосредованная гемолитическая анемия
Болезнь холодовых агглютининов
Кровепаразиты (Mycoplasma haemofelis, Mycoplasma haemocanis, Babesia canis, Cytauxzoon felis)
Анемия с тельцами Хайнца и метгемоглобинемия
Токсичность цинка или меди
Гипофосфатемия
Наследственная гемолитическая анемия
Дефицит пируваткиназы и фосфорокиназы

Вторичная анемия
Анемия воспалительных заболеваний
Анемии хронического почечного и печеночного заболеваний
Гипотиреоз собак и гипоадренокортицизм
Железодефицитная анемия
Заболевания костного мозга
Нерегенеративная имммуно-опосредованная гемолитическая анемия
Истинная эритроцитарная аплазия
Миелодиспластический синдром
Конгенитальный дизэритропоэз
Апластическая анемия
Воспаление/некроз костного мозга
Миелофиброз
Лейкемия
Пролиферативные нарушение макрофагов.
Медикаментозные гематологические дискразии
Токсичность эстрогена, сульфадиазина, фенилбутазона и др.
Инфекции (эрлихиоз, ВЛК, ВИК, парвовирус собак и кошек)

Ниже представлен один из диагностических подходов после выявлении у кошек и собак, он следует из оценки тяжести анемии, подсчета количества ретикулоцитов, оценки морфологии мазка крови мозга и попытки морфологической классификации.

Оценка тяжести анемии

Первый шаг при оценке анемии у животных в ветеринарной клинике - определение ее тяжести. Для этого могут быть использованы такие показатели как гематокрит (Hct), PCV, уровень гемоглобина и количество эритроцитов. PCV - процент цельных клеток состоящих из эритроцитов, получается при помощи микрогематокритной трубки и центрифуги. Гематокрит вычисляется автоматическими анализаторами после определения среднего размера эритроцита и количества эритроцитов. PCV и ге матокрит обычно взаимозаменяемые показатели и служат основой оценки тяжести анемии. Исключение для этого правила встречается при микроцитарной гипохромной анемии и макроцитарной гипохромной анемии.

Таблица. Классификация анемий кошек и собак по степени тяжести, в зависимости от уровня гематокрита.

При определение тяжести анемии, интерпретация PCV и гематокрита должна проводится исходя из статуса гидратации животного, обычно это достигается при измерении общего белка плазмы на рефрактометре. Дегидратация (обезвоживание, гемоконцентрация) обычно сопровождается снижением объема плазмы и повышением уровня общего белка, что ложно повышает гематокрит животного (относительная полицитемия). Дегидратация может маскировать умеренные формы анемии, чаще это происходит на начальных этапах диагностики. Поэтому, статус гидратации животного должен быть нормализован в течении некоторого времени и только после этого может быть проведена оценка уровня эритроцитов (так, при кровотечении, данное время может занять до 1-2 дней). Гипергидратация напротив сопровождается повышением общего уровня плазмы и снижением общего белка, данный феномен обычно проявляется в ложном снижении уровня эритроцитов, что также требует определенной коррекции. Некоторые трудности отмечаются при гипопротеинемии на фоне кровотечения, заболеваниях кишечника, заболеваниях почечных клубочков и сходных патологиях сопровождающихся потерей белка.

У собак, определенную роль на уровень гематокрита может оказывать тонус селезенки, быстрое ее сокращение может вызывать некоторые изменения в распределении эритроцитов, потому как она содержит до 20%-30% массы красных кровяных телец. У кошек селезенка не принимает столь активного участия в циркуляции эритроцитов, и данный феномен отмечается редко. Выброс эритроцитов из селезенки развивается достаточно быстро, и в норме отмечается у здоровых животных. Меньшее значение на определение уровня эритроцитов оказывает расслабление селезенки с выведением эритроцитов из циркулирующего русла (пр. наркоз).

Существует некоторая разница по течению острой и хронической анемии, при медленном развитии снижения уровня эритроцитов у животного происходит физиологическая адаптация к гипоксемии и они могут в течение недель и месяцев жить с минимальными клиническими проявлениями (пр. гематокрит 5%-8% при хроническом развитии анемии).

При определении тяжести анемии, следует помнить о возрастных и породных отличиях уровня эритроцитов у животных, так у щенков в возрасте 2-х и 8-недельного возраста уровень гематокрита обычно соответствует 28%, у гончих гематокрит обычно имеет более высокие показатели по сравнению с общей популяцией собак.

Трудно оценить тяжесть анемии при метгемоглобинемии, когда общая масса гемоглобина животного находится в пределах нормы, но происходит значительное снижение его способности переносить кислород (пр. отравление угарным газом).

Умеренные по тяжести анемии обычно развиваются вторично к другим негематологическим проблемам (пр. анемия воспалительных заболеваний; неоплазия, почечная и печеночная недостаточность, эндокринные патологии), при этом, основные диагностические и терапевтические усилия должны быть направлены на поиск первичных патологий. Выраженные и тяжелые анемии часто указывают на первичное гематологическое заболевание и требуют активных диагностических и терапевтических действий.

Подсчет ретикулоцитов

Первичное суждение об эритропоэзе животного и состоянии функции костного мозга проводится по его способности производить ретикулоциты. При этом могут возникнуть некоторые трудности, и для более полной оценки используется анализ мазка крови и цитологическое исследование костного мозга.

Ретикулоциты – не зрелые эритроциты высвобождаемые в повышенном количестве из нормального костного мозга в ответ на снижение количества эритроцитов. Ретикулоциты содержат остаточные интрацитоплазматические органеллы (рибосомы, РНК) где продолжается синтез гемоглобина, при окраске новым метиленовым голубым (NMB) или бриллиантовым крезиловым голубым (BCB) при световой микроскопии определяются темно-голубые гранулы.

Ретикулоциты кошек подразделяются на две формы - агрегатные и пунктатные, что отражает значительную разницу в скорости их созревания (в отличии от собак). Вначале у кошек происходит выброс агрегатных ретикулоцитов, которые очень быстро (в течение 12 часов) созревают до пунктатных форм. При оценке мазка крови кошек, агрегатные ретикулоциты содержат более 12-15 точек (капель) вплоть до невозможности определить точное их количество, пунктатные ретикулоциты кошек содержат от 3-12 точек (капель) интрацитоплазматических включений. Пунктатные ретикулоциты достаточно медленно (10-12 дней) созревают в организме кошки до зрелых эритроцитов и скапливаются в кровотоке в значительных количествах (по сравнению с агрегатными). Агрегатные ретикулоциты кошек являются лучшим показателем степени регенерации (по сравнению с пунктатными формами) и абсолютное число агрегатных ретикулоцитов более значимый показатель регенерации чем корректируемый процент ретикулоцитов или индекс их продукции. Пунктатные ретикулоциты кошек отражают общий регенеративный ответ и обычно не подсчитываются.

Ни один из современных автоматических анализаторов не способен точно определить количество пунктатных ретикулоцитов кошек, и при оценке регенеративного ответа следует полагаться исключительно на ручной подсчет. У них также возникают значительные трудности при идентификации типов ретикулоцитов. По паттерну ретикулоцитов кошек может быть предположено время развитии анемии, порядка 4 дней с момента начала развития анемии у кошек достигают пика агрегатные формы ретикулоцитов, затем их количество снижается и продолжается рост количества пунктатных ретикулоцитов. Полихроматофилы кошек с мазком окрашенным красителями Райта обычно отражает количество агрегатных ретикулоцитов.

Собаки также как и кошки, вначале высвобождают агрегатные ретикулоциты, которые очень быстро проходят через стадию пунктатных ретикулоцитов (до 24 часов) и созревают до зрелых эритроцитов. В результате быстрого созревания, ретикулоциты собак первичного состоят из агрегатных форм, они содержат значительные массы преципитированной РНК с незначительным количеством пунктутаных форм. Исходя из вышесказанного, ретикулоциты собак не подразделяются на две формы, ввиду малого количества пунктатных форм и отсутствия их клинического значения в диагностике анемии. Большинство лабораторий не подсчитывают эритроциты как ретикулоциты только с одной или двумя индивидуальными гранулами, а включают их в эритроциты с зернистыми артефактами или преципитатом. Ретикулоциты собак примерно равны полихмроматофилам наблюдаемым при окраске мазка красителями Райта, различные краски варьируют в способности проявлять полихроматофилы.

При анемии кровопотери или гемолитической анемии, костный мозг должен увеличить количество ретикулоцитов согласно тяжести анемии. Максимальная выработка ретикулоцитов отмечается в течение 3-7 дней с начала острого эпизода анемии. Если на начальном этапе количество ретикулоцитов мало, но в мазке крови присутствуют другие признаки регенерации (пр. анизоцитоз, полихромазия) - проводится повторная оценка ретикулоцитов (через 3-5 дней). Подсчет ретикулоцитов проводится при гематокрите менее 30 у собак и менее 20 у кошек. Ниже представлена таблица определения степени регенерации в зависимости от количества ретикулоцитов в периферической крови собак и кошек.

Таблица. Степень регенерации кошек и собак в зависимости от количества ретикулоцитов.

Глебова Ольга Анатольевна

Ретикулоциты (от лат. reticulum — сеточка) — это незрелые эритроциты, имеющие структуры, которые выявляются в виде синих гранул при специальной (суправитальной) окраске.

Зачем проводят анализ на ретикулоциты?

Для определения эффективности эритропоэза (процесса образования эритроцитов) в костном мозге. Чаще всего вопрос о проведении анализа на ретикулоциты встаёт, когда у животного выявляют непроходящую анемию. Анемия (греч. «малокровие») — это состояние, характеризующееся снижением концентрации гемоглобина и, в большинстве случаев, количества эритроцитов и гематокрита в единице объёма крови. Определение анемии, как регенераторной или нерегенераторной, важно для дальнейшей диагностики основного заболевания, а также для прогноза течения болезни. В этом случае врачу могут помочь два анализа: биопсия костного мозга (высокоинформативный, но трудоёмкий и дорогой метод) и анализ на ретикулоциты. Дело в том, что в крови здорового животного количество ретикулоцитов крайне мало, а при анемии, например, связанной с кровопотерей или гемолизом, здоровый костный мозг начинает выделять их в увеличенном количестве. Это нормальная реакция, направленная на то, чтобы компенсировать потерю эритроцитарной массы, и в этом случае анемия становится регенераторной. Ретикулоциты выходят в кровь и там дозревают до эритроцитов, при этом, чем моложе ретикулоцит, тем больше времени ему требуется для созревания и тем дольше он определяется в крови. В отличие от людей, у которых в зависимости от возраста клеток выделяют пять групп ретикулоцитов, у кошек определяют две (агрегатные — более молодые, и пунктатные — более зрелые), а у собак всего одну группу (агрегатные). Нерегенераторная анемия может быть связана с первичными заболеваниями костного мозга, в том числе онкологического характера, с инфекциями или являться вторичной, например, при гипотиреозе.
Также анализ на ретикулоциты можно проводить для оценки эффективности лечения анемий, связанных с дефицитом железа.

Когда проводят анализ?

Анализ следует проводить не раньше, чем через 3–5 дней после начала анемии. Это время, необходимое костному мозгу для развития ответа. Поэтому анализ, взятый непосредственно после острой кровопотери, может ложно натолкнуть на мысль о неэффективности эритропоэза. Вместе с тем обнаружение повышенного числа ретикулоцитов в крови животного с нормальным количеством эритроцитов может говорить о хронической потере крови.

Какой материал необходим для исследования?

Для подсчёта ретикулоцитов нужна цельная кровь. При этом материал можно взять из пробирки, в которую была собрана кровь для общего клинического анализа.

Как осуществляют подсчёт ретикулоцитов?

У собак определяют агрегатные ретикулоциты, у кошек — агрегатные и пунктатные. При этом необходима корректировка в соответствии со степенью и продолжительностью анемии. Также полезным является определение абсолютного числа ретикулоцитов, а для собак — ретикулоцитарного индекса.

Ретикулоцитарный индекс является более последовательным показателем, чем определение процентного числа ретикулоцитов, так как учитывает время пребывания этих клеток в крови. Если тяжесть анемии продолжает нарастать, в кровь выделяются более молодые ретикулоциты и время их циркуляции в крови увеличивается. В этом случае процентное содержание будет возрастать, но не за счёт усиления эритропоэза, и нерегенераторную (или гипорегенераторную) анемию можно ложно принять за регенераторный процесс.

При интерпретации результата надо иметь в виду, что слабая анемия может не так активно стимулировать костный мозг, и в кровь будут сразу выделяться зрелые эритроциты.

Существует ли видовая и возрастная специфика?

Да. У собак ретикулоцитарный ответ сильнее, чем у кошек, а значит, и нормализация гематокрита тоже происходит быстрее. Гематокрит — это показатель, отражающий процентное содержание эритроцитов в крови, и удобный для оценки степени анемии.

У лошадей ретикулоциты не определяют вовсе, так как у этих животных данные клетки редко поступают в кровь, даже если в костном мозге есть реакция, и эритропоэз повышен. Поэтому у лошадей проводят пункцию костного мозга. У других животных её можно избежать, используя несложный и не требующий седации анализ на ретикулоциты.

Кроме того, в период прекращения кормления материнским молоком у котят часто бывает субклинический дефицит железа, который ограничивает эритропоэз. Поэтому молодое животное будет менее интенсивно реагировать на кровопотерю, чем взрослые, и у них нельзя ожидать столь значительного повышения числа ретикулоцитов в ответ на анемию.

Ретикулоциты – молодые эритроциты, образующиеся в костном мозге и в небольшом количестве находящиеся в крови. Они являются переходной формой между предшественниками эритроцитов в костном мозге и взрослыми эритроцитами, в большом количестве находящимися в кровяном русле.

Количество ретикулоцитов, подсчет количества ретикулоцитов, ретикулоцитарный индекс.

Синонимы английские

Retic count, reticulocyte index, corrected reticulocyte, reticulocyte count.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную, капиллярную кровь.

*10^9/л (10 в ст. 9/л), % (проценты).

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
Не принимать пищу за 2-3 часа до исследования (можно пить чистую негазированную воду).
Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение за 30 минут до исследования.
Не курить за 30 минут до взятия крови.

Общая информация об исследовании

Ретикулоциты – молодые красные кровяные клетки (эритроциты). Они образуются в костном мозге, когда стволовые клетки дифференцируются и делятся, превращаясь во взрослые эритроциты через стадию ретикулоцитов, постепенно теряя ядро и уменьшаясь в размере.

У новорождённых ретикулоцитов больше, чем у взрослых.

Большинство эритроцитов уже полностью созревшие, когда они покидают костный мозг и выходят в кровяное русло, однако 0,5-2 % из всех циркулирующих в крови – это ретикулоциты, которые превращаются во взрослые эритроциты в течение двух дней. Данный анализ показывает число и процент ретикулоцитов в крови и выявляет адекватность производства эритроцитов костным мозгом и степень его активности.

Организм старается поддерживать примерно одинаковое число циркулирующих эритроцитов, в норме продолжительность жизни каждого из них – около 120 дней. При этом старые эритроциты уничтожаются в селезенке, а новые образуются в костном мозге. Этот процесс регулируется эритропоэтином – гормоном, который производится в почках. В ответ на снижение уровня кислорода в крови почкой вырабатывается эритропоэтин, который затем кровью доставляется в костный мозг, где стимулирует образование эритроцитов. Как только количество эритроцитов повышается, выработка эритропоэтина в почках снижается.

Если происходит разрушение эритроцитов (гемолиз) или нарушается их синтез в костном мозге, возникает анемия. Также ее развитию способствует потеря эритроцитов из-за кровотечения – тогда организм усиливает образование эритроцитов в костном мозге и количество ретикулоцитов в крови возрастает.

Поражение костного мозга (например, опухолью, химиопрепаратами или ионизирующим излучением) приводит к снижению производства эритроцитов и количества ретикулоцитов в костном мозге и периферической крови.

Недостаточное образование эритроцитов приводит к уменьшению их циркуляции в кровяном русле, количества гемоглобина и способности переносить кислород. Соответственно, образуется меньше ретикулоцитов.

В свою очередь, число ретикулоцитов и эритроцитов увеличивается при более активной работе костного мозга. К этому могут приводить разные причины, например увеличение продукции эритропоэтина, хронические расстройства, повышающие число эритроцитов (истинная полицитемия), или курение.

Для чего используется исследование?

Для дифференциальной диагностики типов анемий, а также для определения активности процессов образования эритроцитов в костном мозге.
Для определения тяжести анемии вместе с данным исследованием должен выполняться общий анализ крови, в рамках которого оценивается количество эритроцитов и эритроцитарные индексы, гематокрит и концентрация гемоглобина.

Когда назначается исследование?

При снижении общего количества эритроцитов, гемоглобина и при других признаках анемии или угнетения функции костного мозга. Основными симптомами этого являются: бледность кожи, повышенная утомляемость, одышка, кровь в стуле (признак хронической кровопотери).
Также анализ назначается для мониторинга лечения пациентов с железодефицитом, дефицитом витамина В₁₂ или фолиевой кислоты, почечной недостаточностью, онкологическими заболеваниями.
Если количество эритроцитов повышено (для оценки функции костного мозга).

Что означают результаты?

Пол

Возраст

Референсные значения

Меньше 2 недель

2 недели – 1 месяц

6 месяцев – 2 года

Меньше 2 недель

2 недели – 1 месяц

6 месяцев – 2 года

Пол

Референсные значения

Пол

Референсные значения

У здорового человека количество ретикулоцитов в целом стабильно. Когда количество эритроцитов или гематокрит уменьшаются, процент ретикулоцитов может быть повышенным относительно общего числа эритроцитов – это искусственное завышение числа ретикулоцитов. Так что для более точной оценки тяжести анемии в таких случаях лучше использовать ретикулоцитарный индекс – определение абсолютного количества ретикулоцитов. При этом гематокрит пациента сравнивается с нормальным уровнем гематокрита.

Ретикулоцитарный индекс рассчитывается по формуле: процент ретикулоцитов х гематокрит (показатель, характеризующий степень разжижения крови) / 45 х 1,85. При этом индекс менее 2 будет говорить о снижении активности производства эритроцитов, а больше 2-3 – напротив, о повышении.

Необходимо помнить, что уровень ретикулоцитов отражает недавнюю активность костного мозга.

Причины повышения уровня ретикулоцитов

Кровотечение. Если произошло кровотечение, уровень ретикулоцитов повысится через 3-4 дня, что будет характеризовать попытку костного мозга увеличить продукцию эритроцитов для того, чтобы возместить их потери. При хронической кровопотере уровень ретикулоцитов будет стойко повышен.
Гемолиз (показатель может повышаться до 300 % от нормы) – разрушение эритроцитов внутри организма. Он может происходить по разным причинам: из-за наследственного дефекта эритроцитов, в результате появления антител к собственным эритроцитам или токсического действия при малярии.
Результат лечения анемии. Повышение ретикулоцитов может использоваться как критерий эффективности лечения анемии, а также адекватности подбора дозировки препарата железа при железодефицитной анемии (повышение ретикулоцитов происходит на 8-12-й день). При лечении B₁₂-дефицитной анемии на 5-8-й день наступает так называемый ретикулоцитарный криз, что говорит об адекватности назначенного лечения.
Воспалительные процессы.
Онкологические заболевания костного мозга или метастазы других опухолей в костный мозг.
Полицитемия (повышение количества гемоглобина и эритроцитов) любого происхождения.
Восстановление работы костного мозга после химио- или лучевой терапии.
Прием эритропоэтина.
Если костный мозг не в состоянии обеспечивать адекватную продукцию эритроцитов в ответ на возрастающую потребность, то их количество может быть в норме или слегка пониженным, хотя в конечном итоге все равно будет снижаться.
Если у пациента анемия, а количество ретикулоцитов не повышается, это означает, что в той или иной мере присутствует нарушение работы костного мозга и/или дефицит эритропоэтина.

Причины понижения уровня ретикулоцитов

Железодефицитная анемия.
В₁₂-дефицитная анемия или фолиеводефицитная анемия.
Алкоголизм.
Микседема – снижение функции щитовидной железы.
Апластическая анемия (постоянно сниженный уровень ретикулоцитов – плохой прогноз).
Заболевания почек.
Опухолевое поражение костного мозга или метастазы других опухолей в костный мозг.
Химио- или лучевая терапия.
Хронические инфекции.
Уремия.
Прием карбамазепина или хлорамфеникола.

Что может влиять на результат?

У лиц, поднимающихся на большую высоту, концентрация ретикулоцитов увеличивается, так как их организм адаптируется к пониженной концентрации кислорода.
У курильщиков и у беременных уровень ретикулоцитов может быть повышен.
Жаропонижающие, леводопа повышают уровень ретикулоцитов, а азатиоприн, хлорамфеникол, метотрексат, сульфаниламидные препараты – напротив, понижают.

Уровень ретикулоцитов позволяет более верно предположить, что именно происходит, однако сам по себе не дает основания поставить ни одного диагноза. Зато он может помочь с определением дальнейших обследований или использоваться для контроля терапии.
Ранее подсчет количества ретикулоцитов проводился вручную под микроскопом. Этот метод до сих пор иногда используется, однако автоматический подсчет обеспечивает гораздо более точные результаты.

Кто назначает исследование?

Терапевт, гематолог, педиатр, инфекционист, хирург, гинеколог.

Читайте также: